检测蛋白质的方法及原理

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本文目录一览：

• 1、简述几种蛋白质的测定方法。
• 2、蛋白质的检验方法
• 3、如何准确测定样品中蛋白质的含量
• 4、测量蛋白质含量的方法

简述几种蛋白质的测定方法。

双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

凯氏定氮法 凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。

蛋白质的检验方法

双缩脲法 双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。

检测蛋白质的方法如下：凯氏定氮法：准备4个50mL凯氏烧瓶并标号，向2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品，另外两个烧瓶作为对照，在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物。

一般用双缩脲试剂鉴定，双缩脲试剂可以和蛋白质发生紫色反应。

变色试剂法：例如用布拉德福试剂、比尔斯试剂等进行反应，会产生颜色变化，可以通过颜色的变化程度或者光密度的测量来估算蛋白质的含量。尿液测定法：尿液中的蛋白质含量可以作为一种快速检测指标。

检验固体物质：最简便方法是火烧，闻其是否有烧焦羽毛的气味，有则含蛋白质，无则不含；检验液体物质：最简便方法是加入适量食盐或身边易得的可溶性盐充分混合看其是否凝聚现象出现，有则含蛋白质，无则不含。

双缩脲试剂检测 准备双缩脲试剂和待测样品。将双缩脲试剂A液和B液混合均匀。加入待测样品至双缩脲试剂中，充分混合。观察颜色变化，如果产生紫色反应，则说明样品中含有蛋白质。

如何准确测定样品中蛋白质的含量

1、凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%)，因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即： 蛋白质含量=含氮量/16%。

2、紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的制备中广泛应用。

3、间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

测量蛋白质含量的方法

1、间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

2、(1)试剂：a、标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。

3、紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的制备中广泛应用。

4、凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%)，因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即： 蛋白质含量=含氮量/16%。

5、蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。

6、蛋白质含量测定方法：紫外分光光度法蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。

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